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雞肉和雞蛋中甲硝唑和氯黴素類藥物殘留的檢測解決方案 SPE-UPLC-MS/MS法

2019-06-12

        氯黴素是一種抑菌性廣譜抗生素,常被用于畜禽動物及水産品的疾病治療和預防;甲硝唑為硝基咪唑類藥物,常被加入動物飼料中以驅除動物體内的寄生蟲,因而造成動物源性食品中的藥物殘留。我國農業部第235号公告中已将甲硝唑和氯黴素列為不得檢出藥物,并規定了其他藥物的殘留限量。
       目前檢測甲硝唑、氯黴素類藥物方法很多,但由于甲硝唑、氟苯尼考胺和氯黴素的性質差異比較大,同時檢測的方法很少。迪馬科技在參考各種标準和文獻基礎上,建立了SPE-UPLC -MS/MS法測定雞肉和雞蛋中甲硝唑和氯黴素類獸藥殘留,采用90% 乙腈水提取,ProElut DPC-2固相萃取專用柱淨化樣品,收集流出液,Leapsil C18色譜柱分離檢測。方法特點如下:
1)前處理步驟少,提取液直接通過淨化柱接收流出液即可;
2)有機溶劑消耗量小,前處理過程中也無需使用酸堿試劑;
3)使用ProElut DPC-2淨化柱能夠有效的除掉雜質,淨化效果優異;
4)分析條件簡單,可以一個流動相正負離子同時檢測,大大提高工作效率,減少實驗成本;
5)方法定量限是0.5 μg/kg。
以下為詳細解決方案,敬請參考!

雞肉和雞蛋中甲硝唑和氯黴素類藥物殘留的檢測SPE-UPLC-MS/MS法

1、适用範圍
本方案适用于雞肉和雞蛋中甲硝唑、氯黴素、甲砜黴素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的檢測。

2、标準品配制

(1) 單标儲備液1.0 μg/mL:準确稱取适量各标準品,用甲醇配制成1.0 μg/mL的單标儲備液;
(2) 混标儲備液200 μg/L:分别吸取各單标儲備液,用乙腈配制成200 μg/L混标儲備液;
(3) 混标中間液20 μg/L:準确吸取适量混标儲備液200 μg/L,用乙腈配制成20 μg/L的混标中間液

3、提取

(1) 取5.0 g樣品,加入20 mL 90% 乙腈水溶液,振蕩5 min,超聲5 min,6000 rpm離心
2 min,取出上清液;
(2) 向上清液中加入10 mL乙腈飽和正己烷溶液,振蕩2 min,6000 rpm離心2 min,取下層清液約10 mL,待淨化。(雞蛋樣品加入正己烷後離心後可能會有果凍層,可以先将澄清的正己烷層吸去,然後混勻再離心)

4、淨化—— ProElut DPC-2 12 mL (Cat#: 65940)

小柱不需要活化,取10 mL待淨化液加入柱中,接收8 mL流出液;将接收的流出液在40 ℃水浴條件下氮吹至1 mL以下即可,用水定容至1 mL,過微孔濾膜(Nylon)上機分析。
注:同方法制備基質匹配标準溶液。

5、分析條件

UPLC 條件
色譜柱:Leapsil C18, 100 x 2.1 mm, 2.7 μm (Cat#:86005)
流  速:0.3 mL/min   
進樣量:10 μL  
柱  溫:40 ℃
流動相:A: 10 mmol/L乙酸铵       B: 乙腈

梯度設置

時間/Min. 0 2 6 7 7.5 13
A (%) 90 90 25 10 90 90
B (%) 10 10 75 90 10 10

 

 

 

質譜條件

電離模式:ESI                                    掃描方式:正/負離子掃描
檢測方式:                                         多反應監測 電噴霧電壓:5500 V/-4500 V
霧化氣壓力:50 psi                            輔助氣壓力:50 psi
氣簾氣壓力:20 psi                            離子源溫度:500 ℃

 

定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表

藥物名稱

定性離子對

(m/z)

(母離子/子離子)

定量離子對

(m/z)

(母離子/子離子)

碰撞氣能量/eV

去簇電壓/V

甲硝唑

172.0/127.8

172.0/127.8

20

50

172.0/81.9

32

氟苯尼考胺

247.9/230.0

247.9/230.0

15

72

247.9/130.1

28

氯黴素

321.0/151.8

321.0/151.8

-24

-80

321.0/256.9

-15

甲砜黴素

354.0/184.8

354.0/184.8

-26

-80

354.0/289.8

-16

氟苯尼考

355.8/335.9

355.8/335.9

-13

-70

6、添加回收結果

雞蛋中甲硝唑和氯黴素類檢測的添加回收結果(%)

 
雞肉中甲硝唑和氯黴素類檢測的添加回收結果(%)
 
雞蛋中甲硝唑和氯黴素類5 種獸藥檢測基質匹配标準品1.0 μg/L 的XIC 圖
(從左到右,從上到下依次是:甲硝唑、氟苯尼考胺、氯黴素、甲砜黴素和氟苯尼考)
添加水平為0.5 μg/kg雞蛋中甲硝唑和氯黴素類5種獸藥檢測的XIC圖
(從左到右,從上到下依次是:甲硝唑、氟苯尼考胺、氯黴素、甲砜黴素和氟苯尼考)
 
雞蛋中甲硝唑和氯黴素類5種獸藥檢測基質匹配标準品10.0 μg/L的XIC圖
(從左到右,從上到下依次是:甲硝唑、氟苯尼考胺、氯黴素、甲砜黴素和氟苯尼考)
 
添加水平為5.0 μg/kg雞蛋中甲硝唑和氯黴素類5種獸藥檢測的XIC圖
(從左到右,從上到下依次是:甲硝唑、氟苯尼考胺、氯黴素、甲砜黴素和氟苯尼考)
 
雞肉中甲硝唑和氯黴素類5種獸藥檢測基質匹配标準品1.0 μg/L的XIC圖
(從左到右,從上到下依次是:甲硝唑、氟苯尼考胺、氯黴素、甲砜黴素和氟苯尼考)
添加水平為0.5 μg/kg雞肉中甲硝唑和氯黴素類5種獸藥檢測的XIC圖
(從左到右,從上到下依次是:甲硝唑、氟苯尼考胺、氯黴素、甲砜黴素和氟苯尼考)
 
雞肉中甲硝唑和氯黴素類5種獸藥檢測基質匹配标準品10.0 μg/L的XIC圖
(從左到右,從上到下依次是:甲硝唑、氟苯尼考胺、氯黴素、甲砜黴素和氟苯尼考)
 
添加水平為5.0 μg/kg雞肉中甲硝唑和氯黴素類5種獸藥檢測的XIC圖
(從左到右,從上到下依次是:甲硝唑、氟苯尼考胺、氯黴素、甲砜黴素和氟苯尼考)
 
雞肉和雞蛋中甲硝唑和氯黴素類藥物殘留的檢測相關産品信息:
 

貨号

名稱

規格

樣品前處理

65940

食品中獸藥檢測專用柱 ProElut DPC-2

12 mL, 20/pk

244358

12管防交叉污染真空SPE萃取裝置

12位

4806

考克(控制流量)

15/pk

99011

真空/正壓兩用泵,無油

1/pk

99013

抽濾瓶套裝

(包括矽橡膠管2米, 2 L抽濾瓶及橡膠塞)

1/pk

37177

ProMax針頭式過濾器Nylon

13 mm, 0.22 μm 100/pk

标準品

50P-C15201000

甲硝唑[443-48-1]

250 mg

50D-OP079-10

氟苯尼考胺[76639-93-5]

10 mg

50P-C11120000

氯黴素[56-75-7]

250 mg

50D-223121

氟苯尼考[76639-94-6]

250 mg, 98.5%

50P-C17457000

甲砜黴素[15318-45-3]

100 mg

色譜柱及保護柱

86005

UHPLC/HPLC兼容色譜柱 Leapsil C18

100 x 2.1 mm, 2.7 μm

HPLC溶劑Ÿ緩沖鹽Ÿ離子對試劑

50101

乙腈 HPLC級

4 L

50102

甲醇 HPLC級

4 L

50115

正己烷  HPLC級

4 L

50138

乙酸铵 HPLC級

100 g

通用色譜産品

52401B

瓶架/藍色(現貨)

50孔

52401A

瓶架/白色(現貨)

50孔

5321

螺紋口進樣瓶, 透明帶刻度和書寫

2 mL, 100/pk

5324

樣品瓶蓋/含墊 (白色PTFE/紅色橡膠隔墊)

100/pk

H80465

HPLC 進樣針

25 μL

 

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